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              葡糖-6-磷酸脱氢酶
              葡糖-6-磷酸脱氢酶
              更新时间:2018-11-12
              访问量: 287
              厂商性质: 生产厂家

              葡糖-6-磷酸脱氢酶( glucose 6-phosphatedehydrogenase,G-6-PD 或 G6PD)是糖酵解途径、柠檬酸循环以外的另一个葡萄糖分解途径的磷酸葡萄糖酸途径(磷酸戊糖途径)中

              的*个酶(EC1.1.1.49)。

              葡糖-6-磷酸脱氢酶产品概述:

               

               

               

               

              葡萄糖-6-磷酸脱氢酶(G6PD)检测试剂盒(简易微板法)

               

              产品简介:

               

              葡糖-6-磷酸脱氢酶( glucose 6-phosphatedehydrogenaseG-6-PD  G6PD)是糖酵解途径、檬酸循以外的另一个葡萄糖分解途径的磷酸葡萄糖酸途径(磷酸戊糖途径)

               

              的*个(EC1.1.1.49)

               

              葡萄糖-6-磷酸脱氢酶(G6PD)检测试剂(易比色法)检测原理是红细 G-6-PD 催化葡萄糖-6-磷酸葡萄糖-,后者快氧化成 6-磷酸葡萄糖酸(6-PGA),同 NAPD 原成 NADPH,其反公式如下:

               

              G-6-P+NAPD+  6-PGA+L-NADPH

               

              在上述偶中,NADPH 生成速率本中活性呈正比,通过酶标仪或自分析

               

               340nm 处检测吸光度升高速率( A/min),升高速率( A/min) G-6-PD 活性呈正,直接的活性位。100T 该试剂试剂可以检测 50 本,该试剂用于科研

               

              域,宜用于断或其他用途。

               

              产品组成:

               

               

               

               

              试剂(A): 本稀

              30ml

              -20℃ 避光

              试剂(B): G6PD assay buffer

              30ml

              4℃

              试剂(C): NADP

              9mg

              -20℃

              试剂(D): G-6-P

              1

              -20℃

              试剂(E): G-6-P

              10ml

              RT

               

               

               

               

              自备材料:

               

              1、生理

               

              2、水浴

               

              396 孔板

               

              4酶标仪

               

               

              操作步骤(供参考)

               

              1、准溶血液:取新抗凝血,离心取上清及白,用 4℃冷的生理水洗 2 次,

               

              次取上清必去除剩余的白,再加冷的生理水配成含红细压积为

               

               

               

              30%红细液,4℃保存用。用前,以本稀液稀 25 倍,即溶血液。4℃

              保存 10h-20℃保存 48h

               

              2、配制 NADP 存液:取 9mg NADP 溶解于 1ml G6PD assay buffer,充分混匀,配制

               

               NADP 存液(9mg/ml)-20℃保存用。

               

              3、配制检测工作液:取 NADP 存液和 G6PD assay buffer,按 NADP 存液(9mg/ml)

               

              G6PD assay buffer=149 的比例混合,即为检测工作液。-20℃保存,一个月有效。4、配制 G-6-P 工作液:取 G-6-P 1 支溶解于 G-6-P  10ml,混匀,即 G-6-P

               

              作液,分装成小份后,-20℃保存用。

               

              5、分光光度计检测:按照下表置空白管、定管,溶液按照序依次加入,并注意避免生气泡。如果品中的活性高,可以减少品用量或适当稀后再定。

               

              加入物

              空白管

              定管

              检测工作液(μl)(37℃)

              220

              220

              G6PD assay buffer (μl)

              5

              溶血液(μl)

              5

              混匀,37℃孵育 10min

               

              G-6-P 工作液(μl)

              25

              25

               

              混匀,37℃孵育 60s,在 340nm  1-3min 各管吸光度

               

              化,算各管  A/min

               

              6、生化分析仪检测:按照下表置主要参数。如果品中的活性高,可以减少品用

               

              量或适当稀后再定。

               

              340nm

              温度

              37℃

              孵育时间

              90s

              连续监测时间

              60s

              比色杯光径

              1.0cm

              系数

              8040

              测样

              6μl

              检测工作液

              264μl

              G-6-P 工作液

              33μl

               

               

              计算:

               

              6

                 分光光度计计算公式:G6PD(U/L)= A/min×(10 /6220)×(250/5)= A/min×8040

               

              式中:6220=NADH 的吸光度250=液的(μl) 5=测样品体(μl)

               

               

              生化分析仪计算公式:G6PD(U/L)= A/min×(10 /6220)×(303/6)= A/min×8040

               

              6

               

              式中:  A/min=定的 340nm 吸光度的升高速率

               

              6220=NADH 的吸光度303=液的(μl) 6=测样品体(μl)

               

              参考范围:

               

              成年健康人红细 G6PD8-18U/g Hb

               

               

              注意事项:

               

              1、 血清中 G6PD 活性在室温可以保存 2 天,4℃保存 1 周,-20℃保存 1 个月。

               

              2 重黄疸、脂血或溶血的血清,可能会引起定管吸光度增高。

               

              3 了您的安全和健康,穿实验服并戴一次性手套操作。

               

               

              有效期:6 个月有效。

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