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              OCT冰冻切片包埋剂
              OCT冰冻切片包埋剂
              更新时间:2020-12-10
              访问量: 842
              厂商性质: 生产厂家

              OCT冰冻切片包埋剂是一种聚乙二醇和聚乙烯醇的水溶性混合物,目前已广泛用于免疫组化实验中,其用途是在冰冻切片时支撑组织,以增加组织的连续性,减少皱折及碎裂。又回OCT混合物为水溶性,故在漂片时可溶于水,所以在以后的染色中不会增加背景染色。利用OCT混合物(opti-mum cutting temperature compound)预先浸润组织,然后再进行恒冷箱切片,使切片质量得到改善。

              OCT冰冻切片包埋剂产品概述:

              OCT冰冻切片包埋剂(O.C.T. Compound)

              OCT冰冻切片包埋剂是一种聚乙二醇和聚乙烯醇的水溶性混合物,目前已广泛用于免疫组化实验中,其用途是在冰冻切片时支撑组织,以增加组织的连续性,减少皱折及碎裂。又回OCT混合物为水溶性,故在漂片时可溶于水,所以在以后的染色中不会增加背景染色。利用OCT混合物(opti-mum cutting temperature compound)预先浸润组织,然后再进行恒冷箱切片,使切片质量得到改善。

              OCT包埋剂(SAKURA产品,MADE IN USA)包埋流程:

              1,将放在蔗糖溶液中的组织块取出,放入20g L-1 蔗糖与OCT包埋剂1:1体积比例混合液中,室温浸泡2h

              2,移入OCT包埋剂中室温浸泡4h,更换新的OCT包埋剂,室温浸泡6h.

              3,将标本置于托物台,用恒冷箱切片机切片(一般-22℃),片厚10μm,贴于预处理的载玻片上,-20℃冰箱保存。

               

              组织采样

              1.从每个福尔马林固定石蜡包埋的标本上切下50 µm的切片。每块标本至少要有两个切片,如果需要更多的细胞,则增加切片数量。每次从组织块取样之前和之后,按照5µm大小进一步分割,分出正常和恶性组织。

              2.将分开的小切片放入10 mL管中。给管子贴上编号和「正常」「肿瘤」等标识

              脱蜡

              注意:在化学通风橱中执行以下脱蜡步骤。

              1.通过向管中加入至少2至3 mL AmeriClear【AmeriClear histology clearing solvent (Scientific Products Cat. No. C4200-1)】,开始对切片进行脱蜡或脱蜡处理。在孵育步骤中,应有足够的试剂完全覆盖石蜡切片。

              2.剧烈涡旋震荡样品。与AmeriClear孵育的时间大约为10至15分钟,长为3小时。在移除试剂之前,请用移液管小心地将切片向上拉到试管的侧面,以保持组织完整。吸出剩余的试剂。

              3.再加入2至3 mL AmeriClear,短暂涡旋,然后孵育10分钟。确保组织切片被试剂覆盖。流程如上所述。在进行复水步骤之前,请检查每个管子是否透明,这表明石蜡已完全溶解。

              复水

              以下步骤对于组织的适当复水至关重要,如果执行不正确,可能会导致样品制备过程中碎屑增加。注意:在执行一个复水步骤时,如果酒精看起来浑浊或有明显的蜡沉淀存在,请通过在AmeriClear中孵育30分钟以除去残留的石蜡来除去酒精并执行额外的脱蜡步骤。然后继续补液步骤。

              1.使用以下每种乙醇溶液3 mL:100%,95%,70%和50%的顺序洗涤,对切片进行复水。加入每种新的乙醇溶液后,涡旋标本,并在室温(20°至25°C)下孵育至少10分钟。在添加下一个溶液之前,先吸出每种溶液,在移液之前将切片向上拉到试管的侧面,以保持组织切片的完整性。注意:如果组织脆或很小,则可能很难将组织拉到管壁上。必须注意防止过多的细胞丢失。

              2.加入3 mL纯水完成复水。轻轻吸取残留液体并加入纯水以消除残留的酒精。在室温(20°至25°C)下,将组织放在水中过夜。

              解离

              1.轻轻吸去纯水并重悬于2 mL 1X PBS中,同时准备胃蛋白酶(10分钟)。

              2.轻轻吸出1X PBS,并在每个试管中加入至少2 mL新鲜制备的0.5%胃蛋白酶溶液。以中等速度涡旋约30秒,以确保组织被重悬。

              3.将试管在37°C水浴中孵育1小时。每10分钟摇动或轻轻摇动试管一次,并检查上清液的浊度。对于某些组织,可能需要更长的孵育时间以增加细胞的回收率。一些组织,例如脾脏和淋巴结,可能只需要20分钟即可使上清液变浑浊。这也将取决于酶的活性。

              染色

              1.通过滤网过滤细胞悬液,用1-2 mL的1X PBS冲洗样品管一次,然后倒入滤网中。用尖头镊子挤压滤网以增加细胞产量。

              2.在室温下(20°至25°C)以400 x g离心细胞悬液5分钟。小心除去上清液。

              3.轻轻地将细胞沉淀重悬于1 mL的1X PBS中,并使用光学显微镜在血球计数器中计数细胞。将细胞浓度调整至大5.0 x 10E5细胞/mL。

              Tissue-Tek货号

              名称

              规格

              报价(元)

              库存

              4583

              OCT包埋剂(樱花)O.C.T. Compound

              118ml/瓶

              215.00元

              现货供应

              4583

              OCT包埋剂(樱花)O.C.T. Compound

              12瓶/箱

              2500.00元

              现货供应

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