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              RT-PCR技术服务
              RT-PCR技术服务
              更新时间:2021-02-04
              访问量: 1731
              厂商性质: 生产厂家

              RT-PCR技术服务
              1、引物设计合成(人、大鼠、小鼠、兔等)
              2、基因表达水平检测、内参检测
              3、SNP检测服务
              4、甲基化检测服务
              5、测序技术服务
              6、芯片检测(全基因、MicroRNA)
              7、染色体分析

              RT-PCR技术服务产品概述:

              反转录PCR(Reverse transcriptase PCR,RT-PCR)是一种从RNA扩增cDNA拷贝的方法。RT-PCR对于获得与克隆mRNA的5’、3’末端序列和从非常少量的mRNA样品构建大容量的cDNA文库方面都是极为灵敏与通用的方法。此外,RT-PCR还易于鉴定已转录序列是否发生突变及呈现多态性,还可用于测定基因表达的强度。我公司采用二步RT-PCR法,可满足客户不同的实验要求。
              样品要求:提供的样品要新鲜并尽可能多,不推荐提供RNA样品,或者提供cDNA,并尽可能详细的提供背景资料(基因序列、Genebank accession number扩增产物的用途等)。


              RT-PCR技术服务?基本步骤:
              ● 模板制备:见RNA提取技术服务。
              ● 引物设计
                  客户提供上、下游引物,或者我公司提供免费的引物设计及合成(包括RT-PCR半定量检测中的内参引物)。
              ● 反转录
              (1)Microtube管中配制下列模板RNA/引物混合液,全量<15 μl。

               

               试剂名称  使用量
               模板RNA  2μg
               Oligo(dT)12-18 Primer(50μM)  2.5μl

              (2)70℃保温5分钟后迅速在冰上急冷2分钟以上。 
              (3)离心数秒钟使模板RNA/引物的变性溶液聚集于Microtube管底部。 
              (4)在上述Microtube管中配制下列反转录反应液。

               

               试剂名称  使用量
               上述模板RNA/引物变性溶液  
               5×M-MLV Buffer  5μl
               dNTP Mixture(各10 mM)  1.25μl
               RNase Inhibitor(40 U/μl )  25U
               M-MLV(200 U/μl )  200U 
               RNase free dH2O  up to 25μl

              42℃保温1小时。 
              (5)70℃保温15分钟后冰上冷却,得到cDNA溶液。
              若需要表达,参考基因表达服务。若需要进行RT-PCR半定量分析,接着以下的操作。
              ● RT-PCR半定量分析
              PCR扩增目的基因及看家基因,产物经过琼脂糖凝胶电泳后进行灰度扫描分析。

              RNA模板的制备需另收费(见RNA提取服务)以上为1个目的基因的报价。进行相对定量分析时,同一材料的多个目的基因的价格=1个目的基因价格×目的基因个数。
              提供结果
              完整的实验操作步骤、电泳图、定量分析结果等。

              RT-PCR技术服务参照:

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